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目的建立一種檢測奇異變形桿菌（Proteus mirabilis）快速且特異的PCR方法。方法針對編碼奇異變形桿菌脲酶調節(jié)子（ureR）的基因序列設計2條PCR引物,擴增片段長度為225bp;通過對2株奇異變形桿菌和14株非奇異變形桿菌進行PCR檢測、利用該PCR方法和傳統(tǒng)分離培養(yǎng)法同時對60份食物中毒送檢標本進行檢測來評價其特異性;將奇異變形桿菌菌液做一系列10倍稀釋后進行PCR檢測來對其進行敏感性分析。結果2株奇異變形桿菌出現(xiàn)PCR擴增反應,擴增產物經(jīng)測序鑒定正確,14株非奇異變形桿菌沒有出現(xiàn)PCR擴增反應,且PCR檢測奇異變形桿菌的結果與傳統(tǒng)培養(yǎng)方法一致,PCR方法相比傳統(tǒng)培養(yǎng)方法更快速,在4h內即可完成擴增反應;PCR方法敏感性為30cfu/ml。結論建立了一種快速、準確檢測奇異變形桿菌的PCR方法,適合奇異變形桿菌日常監(jiān)測和快速診斷的需要。
初的PCR技術相當不成熟，在當時是一種操作復雜、成本高昂、“中看不中用”的實驗室技術。1988年初，Keohanog通過對所使用的酶的改進，提高了擴增的真實性。而后，Saiki等人又在黃石公園從生活在溫泉中的水生嗜熱桿菌內提取到一種耐熱的DNA聚合酶，使得PCR技術的擴增效率大大提高。也正是由于此酶的發(fā)現(xiàn)使得PCR技術得到了廣泛地應用，使該技術成為遺傳與分子生物學 分析的根本性基石。在以后的幾十年里，PCR方法被不斷改進：它從一種定性的分析方法發(fā)展到定量測定；從原先只能擴增幾個kb的基因到目前已能擴增長達幾十個kb的DNA片段。到目前為止，PCR技術已有十幾種之多，例如，將PCR與反轉錄酶結合，成為反轉錄PCR，將PCR與抗體等相結合就成為免疫PCR等。
